无公害食品 猪肉
W= ???????????????????????????????????????????????? （E.1）
式中：
W ??试样中磺胺类药物残留量，单位为微克每克（μg／g）；
H ??试样中磺胺类药物峰高，单位为毫米（mm）；
Hs ??标准工作液中磺胺类药物峰高，单位为毫米（mm）；
cs ??标准工作液中磺胺类药物浓度，单位为微克每毫升（μg／mL）；
c ??最终试样液所代表的试样浓度，单位为克每毫升（g／mL）。
注：计算结果需扣除空白值。
附 录 F
（规范性附录）
伊维菌素残留的高效液相色谱测定法
F.1 适用范围
本方法用于测定牛、羊、猪肝脏、肌肉和脂肪组织中伊维菌素的残留量。
F.2 原理
组织中伊维菌素经乙腈提取后用C18固相萃取柱净化，在三氟乙酸酐和N-甲基咪唑存在下，脱水生成荧光化合物，用高效液相色谱仪进行测定。
F.3 可靠的检测限
本方法在动物可食性组织中的检测限为2ng／g。
F.4 仪器
F.4.1 高效液相色谱仪，配荧光检测器。
F.4.2 匀浆机。
F.4.3 离心机。
F.4.4 旋转蒸发仪或氮气吹蒸装置。
F.4.5旋涡混合器。
F.4.6 SPE柱（C18柱，6mL）。
F.5 药品和试剂
F.5.1 伊维菌素标准品：纯度≥90％。
F.5.2 乙腈：色谱纯。
F.5.3 甲醇：色谱纯。
F.5.4 N-甲基咪唑：纯度≥99％。
F.5.5 三氟乙酸酐：纯度≥99％。
F.6 溶液
F.6.1 伊维菌素标准液：准确称取适量伊维菌素标准品，用甲醇溶解，使成浓度为100μg／mL的标准储备液，置-20℃冰箱中保存，可保存一年。临用前，取此储备液，用甲醇稀释成适当浓度的标准工作液。
F.6.2 水-乙腈溶液（9+1）。
F.6.3 三氟乙酸酐-乙腈溶液（1+2）。
F.6.4 N-甲基咪唑-乙腈溶液（1+1）。
F.7 分析
F.7.1 提取和纯化
称取4.0g组织（精确到0.1g），加入40mL乙腈，高速匀浆2min，将样品转至离心管中，以20 000r／min的速度离心10min，沉淀物用乙腈（20mL× 2）重复提取2次，离心后合并提取液，用旋转蒸发仪（60℃）将提取液浓缩蒸去乙腈，向残留物中添加10mL水，摇匀。
将C18预柱依次用4mL乙腈和4mL水-乙腈溶液平衡，使样品液通过C18柱（1mL／min），吹去柱内残留的液体，用5mL乙腈洗脱柱内吸附的伊维菌素，用旋转蒸发仪蒸去溶剂。向残留物中依次加入150／μL三氟乙酸酐-乙腈溶液和100／1LN-甲基咪唑-乙腈溶液，轻轻摇匀后密闭、避光存放，30s后即可供高效液相色谱仪测定。
F.7.2 测定条件
F.7.2.1 色谱柱：C18柱，150mm×4.6mmi.d.，粒度5μm。
F.7.2.2 流动相：甲醇-水（95+5）。
F.7.2.3 流动相流速：1.5mL／min。
F.7.2.4 荧光检测：激发波长364nm，发射波长470nm。
F.7.2.5 进样量：10μL。
F.7.3 样品测定
将分析样品按上述操作条件供高效液相色谱仪分析。
F.7.4 计算
用色谱数据处理机或按式（F.1）计算试样中伊维菌素残留量：
W= ????????????????????????????????????????????????? （F.1）
式中：
W ??试样中伊维菌素残留量，单位为微克每克（μg／g）；
H ??试样液中伊维菌素的峰高，单位为毫米（mm）；
Hs ??标准工作液中伊维菌素的峰高，单位为毫米（mm）；
cs ??标准工作液中伊维菌素的浓度，单位为微克每毫升（μg／mL）；
c ??最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升（g／mL）。
注：计算结果需扣除空白值。
