无公害食品 猪肉
B.6.1 金霉素标准液：准确称取适量盐酸金霉素，用甲醇溶解，使成浓度为100／mg／mL的标准储备液,置冰箱保存。临用前，取此储备液，用甲醇依次稀释成浓度为5.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.1、0.05mg／mL的标准工作液。
B.6.2 MCI-Vaine缓冲液：准确称取Na2HPO4 28.41g，用水溶解，定容于1 000mL容量瓶中，简称溶液A。准确称取柠檬酸21.00g，用水溶解，定容于1 000mL容量瓶中，简称溶液B。取625mL溶液A和1 000mL溶液B混匀，调节pH至4.0±0.05。
B.6.3 MCI-Vaine-Na2EDTA液：准确称取Na2EDTA60.49 g溶解于1 625 mL的MCI-Vaine液中，使成0.01 mol／L Na?2EDTA的MCI-Vaine液。
B.6.4 0.01 mol/L草酸甲醇溶液：准确称取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1 000mL容量瓶中。
B.6.5 0.01 mol/L草酸溶液：准确称取草酸1.26g，用水溶解并定容于1 000mL容量瓶中。
B.7 分析
B.7.1 提取和纯化
B.7.1.1 称取5.00g组织匀浆放人50mL聚丙烯离心管中，添加TCS药物，使成相应的浓度。
B.7.1.2 加入20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液，盖上帽，漩涡半分钟，手摇5 min。
B.7.1.3 4500 r／min的速度离心10 min，上清液倒人另一离心管，再加入20 mL MCI-Vaine-Na2EDTA 液于沉淀中，漩涡半分钟，手摇5min。
B.7.1.4 4 500r／min的速度离心5 min，上清液倒人上个试管中，再加入10 mL MCI-Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩涡半分钟，手摇5min。
B.7.1.5 4 500 r／min的速度离心5 min，混合全部上清液（共50 mL），4 500 r／min的速度离心10 min。
B.7.1.6 用MCI-Vaine-Na2EDTA液湿润抽滤瓶、布氏漏斗及滤纸，用较小真空（水泵）过滤上清液，2×2mL MCI-Vaine-Na2EDTA液洗离心管并过滤。
B.7.1.7 C18微柱先依次用20mL甲醇，20mL水冲洗，之后将过滤的液体倒人50mL注射器中，用2×2mL。MCI-Vaine-Na2 EDTA液洗抽滤瓶并放人注射器中。
B.7.1.8 过C18微柱，使TCS药物吸附在C18微柱上。
B.7.1.9 用20mL水冲洗抽滤瓶倒人注射器中并过滤，水洗C18微柱。
B.7.1.10 用水冲洗完全后，顶空5min。
B.7.1.11 用6.0 mL 0.01 mol几草酸甲醇液把TCS药物从C18微柱中洗脱于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。
B.7.1.12 上述液用滤膜过滤后，上高效液相色谱仪进行检测。
B.7.2 测定条件
B.7.2.1 色谱柱：C18柱。
B.7.2.2 流动相：甲醇-乙腈-0.01 mol／L草酸（1.5+1.5+2.0，pH=2.0）。
B.7.2.3 流速：1.5mL／min。
B.7.2.4 检测波长：350nm。
B.7.2.5 进样量：10mL。
B.7.3 样品测定
分析样品按上述仪器操作条件供高效液相色谱仪分析。
B.7.4 计算
用色谱数据处理机或按式（B.1）计算试样中金霉素残留量：
W= ???????????????????????????????????????????????? （B.1）
式中：
W??试样中金霉素残留量，单位为微克每克（μg／g）；
H ??试样液中金霉素的峰高，单位为毫米（mm）；
Hs ??标准工作液中金霉素的峰高，单位为毫米（mm）；
cs ??标准工作液中金霉素的浓度，单位为微克每毫升（μg／mL）；
c ??最终试样液所代表的试样的浓度，单位为克每毫升（g／mL）。
注：计算结果需扣除空白值。
附 录 C
（规范性附录）
土霉素残留的高效液相色谱测定法
C.1 适用范围
本方法用于测定动物可食性组织中土霉素的残留量。
C.2 原理
组织经MCI-Vaine-Na2EDTA缓冲液（pH4.0）提取，过滤后，通过C18微柱水洗后，用草酸甲醇将药物洗脱，洗脱液用高效液相色谱仪进行检测。
C.3 可靠的检测限
本方法在动物可食性组织中的检测限为0.05mg／g。
C.4 仪器
C.4.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器。
C.4.2 匀浆机。
C.4.3 离心机。
C.4.4 漩涡混合器。
C.4.5 自动电位滴定计。
C.4.6 磁力加热搅拌器。
C.4.7 C18微柱。
C.4.8 布氏漏斗。
C.4.9 球形漏斗。
C.4.10 滤膜：0.45mm。
C.4.11 抽滤瓶。
C.5 药品和试剂
C.5.1 盐酸土霉素标准品：纯度≥90％。
C.5.2 乙腈：色谱纯。
C.5.3 甲醇：分析纯。
C.5.4 乙酸铵：分析纯。
C.5.5 柠檬酸：分析纯。
C.5.6 依地酸二钠：分析纯。
C.5.7 磷酸氢二钠：分析纯。
C.5.8 草酸：分析纯。
C.5.9 三氟乙酸：分析纯。
C.5.10 N，N-二甲基甲酰胺：分析纯。
C.5.11 草酸铵：分析纯。
C.5.12 磷酸氢二铵：分析纯。
C.6 溶液
C.6.1 土霉素标准液：准确称取适量盐酸土霉素标准品，用甲醇配成浓度为100mg／mL的标准储备液，置冰箱中保存。临用前，取此储备液，用甲醇依次稀释成浓度为5.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.1、0.05μg／mL的标准工作液。
C.6.2 MCI-Vaine缓冲液：准确称取Na2HPO428.41g，用水溶解，定容于1 000mL容量瓶中，简称溶液A。准确称取柠檬酸21.00g，用水溶解，定容于1 000mL容量瓶中，简称溶液B。取625mL溶液A和1 000mL溶液B混匀，调节pH至4.0±0.05。
C.6.3 MCI-Vaine-Na2EDTA液：准确称取Na2EDTA60.49g溶解于1 625 mL的MCI-Vaine液中，使成含0.01 mol／L Na2EDTA的MCI-Vaine液。
C.6.4 0.0l mol／L草酸甲醇：准确称取草酸1.26g，甲醇溶解并定容于1 000miL容量瓶中。
C.6.5 0.01 mol／L草酸溶液：准确称取草酸1.26g，水溶解并定容于1 000mL容量瓶中。
C.7 分析
C.7.1 提取和纯化
C.7.1.1 称取5.00g组织匀浆（精确到0.1g）放人50mL聚丙烯离心管中，添加TCS药物，使成相应的浓度。
